De serie draait om de jonge twintiger Sam Winchester en zijn oudere broer Dean. De twee hebben een complexe relatie, omdat zij hele verschillende paden hebben gekozen. Toen ze heel klein waren, hebben ze een familietragedie meegemaakt. Hun moeder kwam om het leven en dat nam hun vader na die tijd volledig in beslag. Sam werd grotendeels grootgebracht door Dean, maar die werd steeds meer door hun vader opgeëist om hem bij te staan.
Sam en Deans vader is namelijk op jacht gegaan om te achterhalen waardoor hun moeder overleden is. Als Sam volwassen is, wil hij niets te maken hebben met wat zijn vader en broer doen, en dus gaat hij studeren om een normaal leven te leiden. Hij heeft nauwelijks contact met de andere mannen in zijn familie, tot Dean opeens bij hem op de stoep staat. Hun vader is tijdens de jacht namelijk verdwenen.
